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細(xì)胞長(zhǎng)得慢、傳代不易貼壁,該怎么挽救?

更新時(shí)間:2022-02-16  |  點(diǎn)擊率:1563

  各類細(xì)胞產(chǎn)品是我們做實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ),一支小小的細(xì)胞,關(guān)乎我們各種實(shí)驗(yàn)的成功與否,細(xì)胞的”小事情“,在實(shí)驗(yàn)中都是”大事情“,如果你的細(xì)胞出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、不貼壁等情況,那你可要注意了,這就是細(xì)胞狀態(tài)不好的信號(hào),要及時(shí)“挽救”,不然很有可能細(xì)胞就瀕臨死亡。

  問(wèn)題一:細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢

  細(xì)胞長(zhǎng)得慢是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中比較常見的問(wèn)題,一般來(lái)說(shuō),細(xì)胞活力和濃度一直是細(xì)胞健康的標(biāo)志,細(xì)胞長(zhǎng)得慢的話,活力和濃度可能都會(huì)直線下降。

  造成細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的主要原因及解決方法:

  1,新配置的培養(yǎng)基以及換了新的血清,細(xì)胞不適應(yīng);

  解決方法:最好使用最適宜的培養(yǎng)基,如果條件不允許,可以換液時(shí)不要全量換液逐漸增加新的培養(yǎng)基比例,1/4、1/2、3/4到1,多傳代幾次,讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。

  2,細(xì)胞密度不夠

  有些細(xì)胞是細(xì)胞依賴性細(xì)胞,密度過(guò)低生長(zhǎng)緩慢;也可能是細(xì)胞分泌促生長(zhǎng)活性物質(zhì)過(guò)少,細(xì)胞連接不好等原因。

  解決辦法:增加細(xì)胞接種密度;將細(xì)胞從大皿轉(zhuǎn)移至小皿培養(yǎng);適當(dāng)增加培養(yǎng)基血清濃度。

  3,培養(yǎng)環(huán)境改變

  細(xì)胞培養(yǎng)箱的溫度、CO2、細(xì)胞的生存環(huán)境要適宜,一般來(lái)說(shuō)最佳溫度:是37 ℃, CO2:濃度為5% , pH:為7.2-7.4,還有滲透壓等,大家要注意調(diào)好,不要隨意改變。

  4,污染,如支原體,細(xì)菌,真菌等

  解決辦法:細(xì)胞污染是多方面的原因,一方面要嚴(yán)格無(wú)菌操作技術(shù)、保持清潔的環(huán)境,另一方面,污染之后要及時(shí)鑒別和處理,并且,建議大家使用品質(zhì)良好的細(xì)胞株和培養(yǎng)基,這是是減少污染的最好方法。

  5,細(xì)胞本身狀態(tài)改變,如衰老等

  解決辦法:沒(méi)有可逆的辦法,只能及時(shí)更換新的細(xì)胞。

  當(dāng)然如果培養(yǎng)細(xì)胞是原代的話,生長(zhǎng)速度是比較緩慢的,如果沒(méi)有及時(shí)換液,營(yíng)養(yǎng)成分不夠,細(xì)胞也會(huì)生長(zhǎng)緩慢。用螺旋口瓶培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),需將瓶蓋微松,以保證通氣,要保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈等。

  其實(shí)只要條件適于細(xì)胞生長(zhǎng),細(xì)胞在自己的“小房子”里面舒適自由,那么,它一定會(huì)長(zhǎng)得很快,并且,形態(tài)越來(lái)越“漂亮”。

  問(wèn)題二:細(xì)胞不貼壁

  一般來(lái)說(shuō),正常情況下,細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間后,正常生長(zhǎng)的小細(xì)胞們貼在壁上,優(yōu)哉游哉地享受生活,而沒(méi)能存活的細(xì)胞和其他種類的細(xì)胞則可能懸浮在上,如果你的細(xì)胞不貼壁,極有可能是沒(méi)有存活下來(lái)。

  細(xì)胞不貼壁可能原因及解決辦法:

  1,胰酶消化過(guò)度;解決方法:適當(dāng)縮短胰酶消化時(shí)間或降低胰酶濃度。

  2,支原體污染;解決方法:分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。

  3,培養(yǎng)瓶瓶底不干凈;解決方法:換用新的培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶。

  4,消化液或培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、過(guò)期儲(chǔ)存、儲(chǔ)存不當(dāng);解決方法:重新配置消化液或培養(yǎng)液

  5,細(xì)胞老化;解決方法:同樣,沒(méi)有可逆的辦法,只能及時(shí)更換新的細(xì)胞。

  6,接種細(xì)胞起始濃度太低或太高;解決方法:根據(jù)細(xì)胞特性接種適量的細(xì)胞。

  總之,養(yǎng)細(xì)胞需要耐心,要溫柔,要不然她真的會(huì)給你顏色看哦。上文也提到了,使用品質(zhì)良好的細(xì)胞株和培養(yǎng)基是減少污染的最好方法,同時(shí)也是保證細(xì)胞生長(zhǎng)良好的前提。

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